樣品收集、處理及保存方法

1.  血清：使用不含熱原和內**的試管
，操作過程中避免任何細胞刺激
，收集血液後
，3000轉離心10分鍾將血清和紅細胞迅速小心地分離
。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝
。3000轉離心30分鍾取上清
。

3.  細胞上清液：3000轉離心10分鍾去除顆粒和聚合物
。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎
。3000轉離心10分鍾取上清
。

5.  保存：如果樣本收集後不及時檢測
，請按一次用量分裝
，凍存於-20℃
，避免反復凍融
，在室溫下解凍並**樣品均勻地充分解凍
。

自備物品

1. 酶標儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恆溫箱

操作注意事項

1.  試劑盒保存在2-8℃
，使用前室溫平衡20分鍾
。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶
，這屬於正常現象
，水浴加熱使結晶完全溶解後再使用
。

2.  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中
，密封（低溫幹燥）保存
。

3.  濃度爲0的S0號標準品即可視爲陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經稀釋5倍
，*終結果乘以5才是樣本實際濃度
。

4.  嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作
。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻
。

試劑盒組成

注：標準品（S0-S5）濃度依次爲：0、5、10、20、40、80 U/L

試劑的準備

 20×洗滌緩衝液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋
，即1份的20×洗滌緩衝液加19份的蒸餾水
。

洗板方法

1.  手工洗板：甩盡孔內液體
，每孔加滿洗滌液
，靜置1min後甩盡孔內液體
，在吸水紙上拍幹
，如此洗板5次
。

2.  自動洗板機：每孔注入洗液350μL
，浸泡1min
，洗板5次
。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min後的鋁箔袋中取出所需板條
，剩餘板條用自封袋密封放回4℃
。

2.  設置標準品孔和樣本孔
，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3.  樣本孔先加待測樣本10μL
，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加
。 

4.  除空白孔外
，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL
，用封板膜封住反應孔
，37℃水浴鍋或恆溫箱溫育60min
。

5.  棄去液體
，吸水紙上拍幹
，每孔加滿洗滌液
，靜置1min
，甩去洗滌液
，吸水紙上拍幹
，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）
。

6.  每孔加入底物A、B各50μL
，37℃避光孵育15min
。

7.  每孔加入終止液50μL
，15min內
，在450nm波長處測定各孔的OD值
。

結果判斷

 繪制標準曲線：在Excel工作表中
，以標準品濃度作橫坐標
，對應OD值作縱坐標
，繪制出標準品線性回歸曲線
，按曲線方程計算各樣本濃度值
。

試劑盒性能

1.  準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值
，大於等於0.9900
。

2.  靈敏度：*低檢測濃度小於1.0 U/L
。

3.  特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應
。

4.  重復性：板內、板間變異系數均小於15%
。

5.  貯藏：2-8℃
，避光防潮保存
。

6.  有效期：6個月

免責聲明

1.   試劑盒僅供研究使用
，不得用於**實驗或人體實驗
，否則所產生的一切後果
，由實驗者承擔
，本公司概不負責
。

2.   嚴格按照說明書操作
，實驗者違反說明書操作
，後果由實驗者承擔
。